1、中文 5500 字 出处： Nakamura R, Kataoka H, Sato N, et al. EPHA2/EFNA1 expression in human gastric cancer.J. Cancer Science, 2005, 96(1):42-7. EPHA2/EFNA1 在人类胃癌中的表达 摘要 ： Eph受体酪氨酸激酶 A2(EphA2)在人类多种癌症中过表达和磷酸纤维化，并伴随着恶性的转化。然而，最近有一则报道指出：刺激 EphA2配体 EFNA1可以抑制胃癌中 EphA2表达。作者使用半定量 PCR方法对胃癌的四个细胞系和 49个原发的胃癌样品及其正常胃癌组织的
2、EphA2和 EFNA1表达进行检测。在 27例患者中 EphA2在癌组织中的的表达比正常组织中高很多（ 55%），而 EFNA1在 28例患者癌组织中过表达（ 57%）。在表达水平和组织学特征如肿瘤大小、年龄、浸润或淋巴结参与之间没有检测到显著的关系。然而 ,EPHA2在宏观 3， 4型肿瘤中的过表达比进展期胃癌 1， 2型突出。作者观察了被检测的四个胃癌细胞系中的三个（ AGS,KATO3, MKN74） EPHA2的表达。在一个细胞系中， TMK1，用 northern blotting， RT-PCR， western blotting 几乎未检测到 EPHA2的表达。相比，在所有细胞
3、系中检测到了 EFNA1的表达。在内生表达 EPHA2胃癌细胞系中由 ephrinA1-Fc刺激引起 EPHA2蛋白表达下降和提高 EPHA2的 磷酸化作用。最后， EPHA2的表达通过可溶的 ephrinA1-Fc的重复刺激而抑制。总之，这些表明 EPHA2 和 EFNA1的表达也许会影响人类胃癌的特征。 EPH受体是目前已知的最大的酪氨酸激酶受体家族并可由细胞表面配体EFN 激活。有证据表明 EPH家族中的许多成员 及其 EFN 配体通过细胞粘附，形成，毛细管生成参与了血管形成和发展。 EPH受体分成两类： EPHA和 EPHB。EPHA的相对应的配体是 EFNA,EPHB的是 EFNB配
4、体。 EPH的表达 转录 已在黑素瘤和癌症中 证实。 EPHA2的过表达被认为在乳房上皮细胞转化为恶性时很重要。 EFNA2过表达食管鳞状细胞癌预后比 EFNA2表达低的差。 胃癌预后很差，激酶在胃癌细胞中的作用是研究的重点。 Ogawa等在 2000年鉴定在一些胃癌病例中 EFNA1和 EPHA2有表达，但是他们的分子作用还不清楚，尽管在胃癌中对酪氨酸激酶进一步研究。 所以，作者 用定量 PCR， RT-PCR, Northern 杂交，免疫印迹杂交对胃癌样本和胃癌细胞系的 EPHA2和 EFNA1的表达水平进行了检测。 这是首例报道 EFNA1和 EPHA2在胃癌中有表达。此外， 作者还在
5、内源表达 EPHA2的细胞系中检测到 EFNA1的刺激作用。 材料与方法 组织 从 滨松大学医学院 49例外科手术中取的人类胃癌标本及对应的非肿瘤组织用于 RT-PCR，这些患者的临床病理特征见表 1并用日本标准分类。这些样品包括 22例高分化（管状与腺状类型）， 24例低分化（包括粘蛋白状类型）和 3例其他类型（ 2例腺型和 1例神经内分泌型）。这些样品包括 6例早期胃癌（肿瘤在胃壁的粘膜下层及粘膜层）和 43例进展期胃癌（肿瘤侵袭胃壁的本身肌肉组织层）。根据病理的肿瘤淋巴转移分类，这些样品有 18例是 I， 级，和 31例达 III， 级。所有的样品均用液氮冰冻保存 80 直到 RNA提取
6、。 这些研究已经滨松大学医学院审查委员会机构批准 。 tub1小管腺癌，分化良好型； tub2小管腺癌，中度分化型； pap,乳突状腺癌； por1，低分化腺癌，突体型； por2,低分化腺癌，非突体型； muc,粘液腺癌，其它，磷状腺癌和神经内分泌癌；除了 0型，浅表，扁平癌细胞和 5型未分类癌，这一种类被叫做早期癌这一种类被叫做晚期癌。 N0用这种日本分类法 .(12) N1, N2 and N3用的也是 JCS法 T检验法和秩和检验法。 细胞培养 在添加 10%胎牛血清的 RPMI1640中培养胃癌细胞系（ KATO3, MKN74,TMK1），而 AGS细胞系用添加 10%胎牛血清的 Hams F12K培养基培养。293T人类肾胚胎细胞系用已添加 10%胎牛血清的 DMEM培养 基培养。 RNA提取和反转录 根据厂家纪录使用 ISOGEN RNA提取试剂盒从人类组织中提取总 RNA。从总的 RNA得到单链 cDNA， 20L体系中还含有 1g oligo dT随机引物， MMuLV-R
