1、 1 中文 3195 字 出处： Lin L, Prescott M S, Zhu Z, et al. Identification and characterization of a 19q12 amplicon in esophageal adenocarcinomas reveals cyclin E as the best candidate gene for this amplicon.J. Cancer Research, 2000, 60(24):7021-7. 对食管癌 19q12 扩增子的鉴定 和描述显 示 Cyclin E 是这个扩增子的最佳候选基因 摘要 肿瘤基因组扩增常
2、与癌基因和其他的肿瘤相关基因拷贝数增加有关。我们用一种二维全基因扫描技术来检测食管癌中基因扩增事件。肿瘤双向凝胶上的多拷贝基因片断被克隆，包含这个片断的扩增产物用 Southern blot 来确定。相应的 DNA 序列用 BLAST 匹配到 BAC 毗连 DNA 序列，后者用电子 PCR 定位在 19q12。我们实验室最近用序列标记位点扩增图的方法描述这个扩增子。从 11 个胃癌和 65 个贲门癌病例中的基因组 DNA 用定量 PCR 在克隆的片段上 11 个序列标记位点附近检测 19q12 扩增子。扩增子在 D19S919 和 D19S882 之间。这个区域包括 Cyclin E 基因。在
3、 14 个表达的 ESTs 覆盖的区域中用定量 RT -PCR 时分析潜在的基因过表达。其中有 7 个 ESTs 既有扩增又有过表达。在这 7 个 ESTs 中， Cyclin E 基因扩增和过表达的频率最高，这使我们把和扩增的区域限制在 137 kb 的 DNA，含有 Cyclin E序列，但无相邻的 ESTs。 ESTs 10, 11, 12,和 14 序列与 AC008507 匹配。发现 ESTs 3, 7, 8 和9 被包含在 AC010513。 ESTs 4 和 5 在 AC010505 (表 3)。对具有 ESTs 的微小关键区的分割和物理作图清楚的显示， Cyclin E 位于
4、ESTs7, 8， 9 和 ESTs 10， 11 之间，而不是在 GeneMap99中显示的在 ESTs5 和 ESTs7 之间。而且，一个未知的 ESTs， sts-X95406，位于 ESTs9 和 ESTs10之间，与 Cyclin E 同源。在这 7 个扩增和过表达的 ESTs 中， ESTs4， 5， 7 的扩增包含 19q12扩增子。说明 Cyclin E 是基因扩增和 mRNA 过表达频率最高。 讨论 我们用双向基因扫描方法检测 19q12 上 NotI 片段的扩增。这些说明 19q12 扩增 子的特性在食管癌和胃癌的发展过程中起着重要作用。用 QG-PCR 分析 STS 扩增
5、作图的方法显示19q12 扩增子的 微小关键区域在 D19S919 和 D19S882 之间。用定量 RT -PCR 分析在微小区域的 14 个 ESTs 来确定包含 19q12 扩增子的肿瘤的表达类型。 Cyclin E 是基因扩增和 过表达频率最高在被检查的肿瘤中，而且定位于 19q12 扩增子 300-kb 的 核心区域。 Cyclin E 的基因扩增和 过表达可能是早期事件，因为在 Barretts 粘膜化生和 50% (5 of 10)的 II 期肿瘤均有这个扩增子的过表达和 扩增。本研究第一次全面地描述了 19q12 扩增子的特性，也第一次对这个包含 Cyclin E 的 300-
6、kb 的 核心区域进行物理作图。 基因扩增使基因数量选择性增加。由于扩增涉及到一个大的染色体片断，所以有相邻基因的共扩散 24。尽管程序化的基因扩增是低等生物的正常发展过程中的一部分 (25 , 26)，但在哺乳动物暴露于细胞毒药物和发癌过程中有显著的不规律的基因扩增 (28 , 29)。因此，探讨肿瘤基因扩增对发现起主要作用的癌基因和肿瘤相关基因有着重要的作用。在本研究和其他的研究中双向 RLGS 方法是达到这一目的的有效的方法 (9 , 10 , 18)。我们运用的 STS 扩增图的方法有效的得出微小关键区域的范围，从而缩小了选择潜在候选基因的范围 (10)。 Cyclin E 是 cdk2-E 复合体的调节亚基，后者在 G1 期到 S 期之间确实细胞进入 S 期 (11 , 12)。在本研究中， Cyclin E 基因的扩增是含有 Cyclin E 扩增子肿瘤 cyclin E mRNA 和蛋白水平上调的基础。在 果蝇属卵子发生中 Cyclin E 的出现需要另一个基因 chorion 的扩增 (30)。解除管制的 Cyclin E 可能是促使肿瘤基因
