1、中文 4125 字 出处： Okochi M, Ohta H, Tanaka T, et al. Electrochemical probe for on-chip type flow immunoassay: Immunoglobulin G labeled with ferrocenecarboaldehydeJ. Biotechnology & Bioengineering, 2005, 90(90):14-9. Fc-CHO标记免疫球蛋白 IgG构建的芯片流动免疫分析的电化学探针 M Okochi， H Ohta， T Tanaka， T Matsunaga 摘要 ： 利用席夫碱基的形
2、成及其还原性，用二茂铁甲醛（ Fc-CHO） 标记免疫球蛋白 IgG构建一种电化学活性探针，用于微型化电流型免疫分析。每个 IgG分子标记约八个Fc-CHO分子，且二茂铁甲醛的氧化还原性能不变。与二茂铁单甲酸（ Fc-COOH） 传统的标记方法相比，标记效率提高三倍以上；同时，用酶连免疫吸附检测法（ ELISA） 及表面等离子共振分析法研究 Fc-CHO标记的 IgG与抗原 IgE间的亲和能。由于每个 IgG分子可结合约八个 Fc-CHO分子，且对其抗原显示出强的亲键结合力，在流动电化学检测（工作电位 390mV vs.Ag/AgCl）中的响应电流比 Fc-COOH标记的 IgG强 14倍。用
3、 Fc-CHO标记的 IgG做检测探针， 可检测的 浓度极限为 0.6 M 。由于 Fc-CHO标记的 IgG显示了良好的生物化学和电化学活性，在研制理想的 电 化学免疫传感器中极为有用。 关键词 ： 电化学探针；芯片；免疫分析；二茂铁 引 言 免疫分析是一种应用于临床诊断，环境分析，生化研究的重要方法。免疫传感器根据检测原理，可以分为光学，电化学，微重量分析几种。基于 ELISA分析的化学发光或荧光检测应用最广泛。但是，它需要有微量进样系统的精密检测装置。由于电化学检测方法的灵敏度高，费用低，耗能少，且与高级显微仪器有良好的兼容性，非常适合传感器的微型化和自动化检测。 化学与生物技术操作的微
4、型化为诊断检测的各个方面带来深远影响。综合微型流动设备的分析能力和抗 体 -抗原结合的高特异性制成的微型免疫传感器已经得到广泛发展。 (Bernard et al., 2001;Kojima et al., 2003; Lim et al., 2002, 2003; Saleh 和 Sohn,2003; Sato et al., 2002; Wang et al., 1998, 2002; Wang 和 Jin, 2003).二茂铁衍生物常被用来做免疫分析 (Lim et al., 2002, 2003; Padeste et al., 2000; Wang et al., 2002)以及 D
5、NA杂化测定的电化学信号探针。标记了二茂铁衍生物的酶 ， 如葡萄糖氧化酶作为生物传感器的电子媒介 得到了广泛应用。另外， 通过化学交联剂 （ NHS&EDC） 将 Fc-COOH标记在 IgG上已普遍应用。但是只有两至三个二茂铁分子能牢固结合 IgG，且亲和键能不强。因此，需要一种新的标记方法来使更多的二茂铁分子标记在 IgG上以用于灵敏检测 。 在目前的研究中，标记 Fc-CHO的 IgG已 用于灵敏检测。标记 Fc-CHO的 IgG电化学性质已得到研究，且结合在 IgG上的二茂铁数目可通过原子吸收光谱得到分析，其与抗原间的 亲和键能也可测得。用 Fc-CHO作为标记物 ，能使更多的二茂铁标
6、记在 IgG上，因此能得到更强的电化学信号。 材料与方法 试剂 羊抗人 IgE IgG抗体与人抗原 IgE，分别购自 Valeant Pharmaceuticals International (Costa Mesa, CA) 和 Chemicon International (Temecula,CA)。 ALP购自 Zymed Laboratories (South San Francisco, CA). Fc-CHO 和 Fc-COOH购 自 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO).用于 ELISA分析的鲁米诺 530购自 Wako Pure Chemical Industries (Osaka, Japan).其他试剂均用分析纯或实验室等级。 用 Fc-CHO， Fc-COOH标记 IgG 用 Fc-CHO标记 IgG的方法如下 ， 5.5 mg羊抗人 IgE IgG溶解在 2 ml磷酸盐缓冲液（ PBS） 中 ， 并用 5% K2CO3调节 pH值至 9.3,再将 Fc-CHO溶解在
