1、PDF外文：http:/ 中文 6250 字 出处： Yahia E M, Soto-Zamora G, Brecht J K, et al. Postharvest hot air treatment effects on the antioxidant system in stored mature-green tomatoesJ. Postharvest Biology & Technology, 2007, 44(2):107-115. 采后热处理对番茄品质和抗氧化水平影响 Gloria Soto-Zamora, Elhadi M.Yahia, Jeff
2、rey K.Brecht, Alfonso Gardea 摘要 ： Rhapsody番茄 分别 在 34-38 大气 条件下 与 5%O2,38条件下热处理 24h 相比较 ，以测定 伴随热伤害时 ，热处理应用于减少氧分压时是否能减少与压强有关的氧化变化。 水果在 4或 10条件下保存 30 日。在温度为 10的贮藏期间， 将未加热的水果与 在 34空气中加热 24h的水果 相比较其区别。 在所有处理中， 4的贮藏 条件 抑制了类胡萝卜素的形成。 在大 气或 5%O2条件下热处理的果实损失了大量的抗坏血酸和异抗坏血 酸。在贮藏 末期 ，番茄的
3、谷胱甘肽还原酶活性与所有水果相似， 而最初是在 5的氧气中热处理的 番茄的 谷胱甘肽 S -转移酶活性高于 其他种类的水果。 Rhapsody番茄在于 10贮藏 30 日之前先于 34的空气中加热 24h，从而导致最后番茄抗氧化成分的损失，在色泽上也有适度改变。减少氧气含量既不会提高为减少冷害 而热处理的有利影响，也不会 从热处理的消极影响中保护番茄不受损伤。 关键词： 番茄； 采后；类胡萝卜素；番茄红素；抗坏血酸； 异抗坏血酸；半胱氨酸；谷胱甘肽；谷胱甘肽还原酶；谷胱甘肽 -S-转移酶 1. 引言 番茄是全世界范围 内一类重要的农产品。番茄和以西红柿为原料
4、的产品因为多方面因素而被评为健康食品。它们低脂肪，低热量， 不含胆固醇， 是 纤维的良好来源。 此外，西红柿中富含维生素 A 和 C， -胡萝卜素，番茄红素 (Mangels, Holden, Beecher, Forman, & Lanza, 1993)和一些其他抗氧化剂 (Davies & Hobson, 1996)。 根据流行病学研究，番茄类胡萝卜素在预防疾病，如癌症，白内障疾病和心胀病等方面具有重要作用 (Siemensma, 1996； Agarwal & Rao, 2000； Rao & Rao, 2003)。抗氧化剂的单独和协同效应 以防止或延缓氧
5、化反应，从而延缓退行性疾病，包括癌症，心血管疾病，白内障和一些其他疾病 (Block, Patterson, &Subar, 1992). 然而，西红柿在温度低于 11时对冷害很敏感 (Cheng &Shewfelt, 1988).热处理已被报道过可改善冷害，除此之外，还有其他的一些有利因素，如控制成熟度，腐败度，虫害等 (Lurie, Laamim, Lapsker, & Fallik, 1997； Yahia & Ortega, 2000).热处理应用于控制气体成分主要是研究大多数水果的控制虫害方面 (Ortega & Yahia, 2000； Ya
6、hia &Ortega, 2000)而不是其他影响因素，如改善冷害等。热处理对果蔬的抗氧化成分具不利影响 (Jonsson, 1991)，然而，降低氧分压可防止这些消极影响。 本实验就是研究西红柿 在 34 或 38大气条件下或 5%O2,38条件下采后热空气处理 24h 后，西红柿的质量和抗氧化剂的改变。 2. 实验原料和实验方法 取生长于温室 (Agros, Colon, Quere taro)中的西红柿 (Lycopersicon esculentum, Mill. cv Rhapsody)。 采收绿熟期的西红柿，并马上运到实验室，挑选出大小
7、，颜色，质地均匀一致的果实，每 160 个西红柿为一组，把它们分成同类型的四组。将未经热处理的西红柿 于 4和 85%的湿度（气压亏损 0.19KPa），或 10和 85%的湿度（气压亏损 0.19KPa）的条件下，贮藏 30 日。第二组于 38 ,50%的湿度（气压亏损 2.68 KPa）的 空气中加热 ，另外一组 于 38 ,50%的湿度（气压亏损 3.33 KPa）在 含 5%的氧气（平衡氮气） 加热，最后一 组于 34 ,50%的湿度（气压亏损 2.68 KPa）的空气中加热。对不同批号的西红柿，重复使用热空气处理。加热后的西红柿马上放在水中冷却至室温，达 30 分钟 ，然后如同上述的
8、将其贮藏于 4或 10条件下。在将西红柿进行贮藏之前，应对每一单个样本进行评估，随后在贮藏期间，每三天都要取出样品。 热处理和气调处理 都是在一个密闭，可控温，强气流的室内进行的 (Ortega & Yahia, 2000； Yahia & Ortega, 2000)。这个密闭容器（高 156 厘米，宽 70 厘米，深 132 厘米）由不锈钢构建所成 (Techni-Systems, Chelan, WA, USA)。 通过电加热棒使这个容器的温度比室温高，四个 1000W，230V 的电加热元件使这个电热棒在 20-60范围内保持 0.1的变化。每两个端口通过四个
9、雾化喷嘴来提供湿度，一个用于压缩气体，一个用于压缩水分。当 压缩气体通过喷嘴时，利用文丘里效应从加湿水库中吸引了蒸馏水，然后再重新蓄到喷嘴中。当需要更高湿度的时候，两个电磁阀将同时进行；让每一压缩空气流经喷嘴。空气进入容器的速率是 5m.s-1,而容器内的空气流速是3m.s-1 这个处理时间的长短得看使容器密 闭所花的时间以及所消耗的热量和气流量。氧气和二氧化碳气体的浓度通过注入空气和氮气来控制。维持二氧化碳含量不到 1%。使用测量范围从 0-25%的电化学氧气分析仪，和测量范围从 0-80%的红外线 CO2分析仪 (David Bishop Instruments, East Sussex,
10、 UK)。 失重是通过每个水果在处理前后 ，每次评估中测量重量来评估的。色泽方面用 Spetra QC7.2版本的 Minolta CM-2002 色度计， CIELAB 系统来测定 (Minolta, Tokyo)。 以下是 测定新鲜番茄样本（果皮加 表皮）的叶绿素含量。 番茄样品（ 3g） ，分别培养于 15 毫升的乙醇中 16h，均质，并通过两层的海绵层过滤，然后用 DU-65 分光光度计 (Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA, USA)分别测定 660nm 和 642.5nm 处的吸光度。通过以下方程来计算叶绿素的总量 (AOAC, 1
11、997): (7.12 A660)+(16.8 A642.5).按照 AOAC（ 1997）的方法，并加入一些修改，进行类胡萝卜素的提取。新鲜的番茄（果皮加表皮）组织样本（ 5g） 于 15 毫升的正己烷：丙酮：乙醇： 甲苯（ 10:7:6:7）的混合溶液中匀浆一分钟， 在 1 毫升甲醇中加入 100 万毫升氢氧化钾后，再将混合液匀质 16h。再往混合液中加入 15 毫升正己烷匀质一分钟，然后，再加入 15 毫升浓度为 10g.kg-1Na2SO4将混合液搅拌一分钟，然后匀质 1h。取上清液，并用分光光度计于 470nm 处测其吸光度。 番茄红素提取的方式与总的类胡萝卜素相似，但它
12、是采用冻干番茄组织样本，加入混有 100万毫升氢氧化钾的甲醇溶液后，样品在 56加热 20 分钟，然后在室温下马上置于水浴中。取出上清液并通过 0.2毫米的尼龙膜筛选。 通过 HPLC 4.6 150mm YMC 类胡萝卜素 C-30 列 (YMC, Inc., Wilmington, NC, USA)和光电二极管检测器来测定番茄红素的含量。流动相 用的是三丁基甲基醚：水：甲醇从 15:4:81 到 90:4:6 的线性梯度处理 90 分钟，流量为一分钟 0.75 毫升。然后测其在471nm 处的吸光度。 根据 Zapata 和 Dufour（ 1992）提取抗坏血酸和
13、异抗坏血酸。 通过有二极管阵列检测器的 HPLC配备和一个 10 微米的 mBondapak C18 柱（ 3.9 300 2）， 10 微米的 mBondapak C18 柱 （ 3.9 20 2）来进行量化。流动相为 甲醇：水（ 5:95）的混合溶液，其中含 5 毫升溴化十六烷和 50 毫升的磷酸二氢钾，流量为每分钟 1.5 毫升。在 261nm 处测其吸光度。 根据 Farris 和 Reed (1987)的方法以及一些修改方法，来测定 半胱氨酸，减少 的 氧化型谷胱甘肽 的 含量 。 取 0.25g 的 冻干组织于 含有 2.5 毫升浓度为 10g/kg 的高氯酸和 1 毫升磺酸的水溶
14、液中匀质，然后作为样品。将匀浆液在 4， 7800 gn 离心机离心 20 分钟，重新收集上清液中的颗粒然后进行相同的提取工艺，并将上清液合并。 向 甲提取物加 50 微 升的 -谷氨酰 -谷氨酸（ 0.5 毫米） ，用 50 微升 100 毫米 羧甲基碘乙酸 缩合，用 0.2mM 间甲酚紫 溶解 ， 加 KOH (2 M)和 KHCO3 (2.4 M),使溶液的 PH 达到 9-10，然后暗处理 15 分钟。再向样品中加入 1 毫升 1的 2,4 -硝基 - 1 -氟苯 ，并在 4暗处理一个晚上。 第二天将它们在 13000 gn 下离心 15 分钟，在进行高效液相色
15、谱法前将它们通过 0.2 毫米的尼龙膜过滤。流动相 A 加 80g/kg 甲醇流动相 B 加 800 毫升溶液，这种溶液中每 448 毫升水中含1kg 醋酸钠， 3.2 升 80%的甲醇中加入 1.39 升冰醋酸。 高效液相色谱法开始运行， 80 A 和 20 B5 分钟， 随后 10 分钟 有 一个线性渐变遵循的 1 A和 99 B， 保持 2 分钟，然后恢复到初始条件， 超过 5 分钟 的 线性梯度，为重新平衡分列条件 在这种情况下 保持 15 分钟。 一个 50 毫升的样本提取，羧甲基化和衍生到一个 5 毫米的所有领域氨基柱（ 2504.6 平方毫米）注射，流速为 1 分钟
16、1mL，在 365 nm 读取吸光度 。 为测 谷胱甘肽还原酶（ EC1.6.4.2） 的 活性， 取 0.15 克冻干组织匀浆样品在 2.5 0.1M 的磷酸盐缓冲液（ pH 7.0），其中 加入 1 毫米 EDTA， 1 毫米 的 二巯基乙醇， 0.5的 Triton X - 100，和ML 2g， 1kgPVPP，并在 17,400 gn 离心 20 分钟。反应介质 含有 1000 微升 钾磷酸盐缓冲液（ 0.2米， pH 值 7.5）， 150 微升 的 NADPH（ 2 毫米）， 150 微升 20 纳米氧化型谷胱甘肽， 100 微 升 酶提取液 ， 600 微升水溶液。
17、 (Iio, Kawaguchi, Sakota, Otonari, &Nitahara, 1993). 以 测 谷胱甘肽还原酶同样的方式检测谷胱甘肽 S -转移酶（ EC2.5.1.18）。 反应介质中 包含 1585微升 的 0.1M 的 磷酸 钾 缓冲液（ pH 值 7.0） ，其中 含 1 毫米的 EDTA， 15 微升 150mM CDNB（ 1 -氯 -2,4二硝基苯）， 100 微升 75 mM 还原型谷胱甘肽（ GSH）， 300 微升 酶提取物 (Iio et al., 1993).按Bradford（ 1976）利用牛血清白蛋白的标准 来 测定蛋白质含量。 通过 方差分析（ P 0.05）， 和 使用电脑程式 (JMP 4.0.4, SASInstitute Inc.).手段 相 比较 (Students t, P 0.05)， 来评价统计意义。不同批次的西红柿重复两次处理。 3. 结果与讨论 在密闭室内热处理的前 3 小时内，温度将升高， 然后 再 设定温度稳定， 如 （图 1）在 热处理的前 0.5 小时将达到 所需 的 氧气浓度。 如 （图 2） 在贮藏期间失重增加，并通过热处理和高温处
