1、 1 实验目的 1.1 熟悉对禽的病理解剖 1.2 掌握对病变的观察 1.3 鸡胚的病毒液接种 1.4 掌握 HA 和 HI 试验操作过程和技术 2.鸡的人工发病试验 21 日龄三黄鸡 14 只，每只鸡肌肉注射 0.5mL 未知病原悬液（约 100EID50）,每天上午 9:00、 下午 5:00 各观察一次，记录鸡的采食情况、精神状况、有无发病症状、有无死亡。如有死 亡，对死亡鸡进行剖检，采肝脏、脾脏等病料，将病料暂存于-20C 冰箱中。 观察可知病鸡精神沉郁，鼻有分泌液，常甩头，无下痢，无死亡。 3 家禽解剖 3.1 放血、宰杀后，用消毒药进行浸泡。 3.2 腿内侧剪开，用力将股骨外翻，将
2、鸡平放在解剖托盘内。 3.3 腹腔，肝脏出血肿胀，肠道出血，胰腺、肾脏、法氏囊、盲肠扁桃体等有无病变或异常， 剪开腺胃和肌胃，观察腺胃乳头和肌胃角质膜下无出血。将龙骨突用力上翻，观察肺脏、支 气管等，外观没有病变，沿食道、气管剪开，发现气管内有大量出血点。 4 实验原诊断 4.1 接种物准备 4.1.1 将肺脏、脾脏、肾脏、肝脏、心脏、支气管等脏器物小许，放入灭菌钵中。加入少许 石英砂，进行研磨，边研磨边加入 PBS 进行稀释。 4.1.2 抽取组织液装入离心管 3000r/min，离心 5 分钟。 4.1.3 用注射器抽取离心上清液，装上细菌过滤器，将组织液过滤到灭菌离心管中。 4.2 胚蛋
3、接种 4.2.1 将胚蛋在经照蛋器照蛋，避开气室和血管，用铅笔进行标注。 4.2.2 打孔。 4.2.3 每个鸡胚接种 0.2mL 组织液。 4.2.4 用蜡烛进行封口。存放 2 天。 4.3 鸡胚接种结果 两天后打开鸡胚气室和尿囊膜，胚内液体清亮。 5 血凝（HA）试验 5.1 材料准备 5.1.1 96 孔 V 型微量反应板、微量移液器（配有滴头） 5.1.2 阿氏液、1%鸡红细胞悬液。 5.1.3 PH7.20.01mol/L PBS. 5.2 血凝（HA）试验 5.2.1 在微量反应板的 1 孔12 孔均加入 0.025mlPBS，换滴头。 5.2.2 吸取 0.025ml 病毒悬液加
4、入第 1 孔，混匀。 5.2.3 从第 1 孔吸取 0.025ml 病毒液加入第 2 孔，混匀后吸取 0.025ml 病毒液加入第 3 孔， 如此进行对倍稀释至第 11 孔，从第 11 孔吸取 0.025ml 弃之，换滴头。 5.2.4 每孔加入 0.025ml 体积分数为 1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入） 5.2.5 震荡混匀，在室温（2025）下静置 40min 后观察结果（如果温度太高，可置 4 环境下） ，对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。 5.3 结果判定 将板倾斜，观察红细胞有无呈泪滴状流淌，完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数 代表一个血凝单位（HAU）. 5.4 试验结果 孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 血清 稀释 度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 对 照 结果 - - - - - - - - - - - - 从结果可以看出，该病毒的不能血凝。 6 实验结果 通过血凝试验和血凝抑制试验的血凝价等因素可以判定该鸡感
