1、 1 引言 隐孢子虫（Cryptosporidium）是细胞内寄生原虫，能感染人与多种动物的消 化道和呼吸道而引起隐孢子虫病（Cryptosporidiosis)1。自从Tyzzer2在小鼠粘膜 组织中发现小鼠隐孢子虫(C. muris)以来，隐孢子虫已经被认为是世界脊椎动物 中的一种广泛传播的重要寄生虫，包括中国在内，隐孢子虫已经在世界上六个大 洲90个国家发现3,4,5，并经常在婴儿和儿童中发现。现今被公认的隐孢子虫有14 种，其传播途径以卵囊经粪-口途径为主6,7。与其它介水传播性原虫相比，隐孢 子虫因粒径小于10 m和自身对消毒药的较强抵抗力而被净水工艺除去的难度更 大，即使在滤过水中
2、，卵囊的检出率在英国和美国分别达到37%和26%，因此， 隐孢子虫污染已经成为水源监测的重要指标6,8。如今，隐孢子虫能感染包括人 在内的240多种动物，其中包括野禽、两栖动物等许多野生动物，是现今引起动 物腹泻的主要病原之一，严重威胁着人和动物的健康，造成了巨大的经济损失。 麋鹿属于国家一级保护动物，是中国特有的动物，也是世界珍稀动物，曾经 是国际自然保护联盟 IUCN(World Conservation Union）红皮书规定的极危物种。 目前，虽然世界的麋鹿总数已经繁殖达 4000 头，但仍然是濒危物种。近几 年来,隐孢子虫屡次在野生和人工饲养的多种鹿类中发现，严重威胁着鹿的健康， 而
3、至今未见关于麋鹿隐孢子虫病的调查。因此，积极开展麋鹿隐孢子虫病的流行 病学调查，对其防治有着重要的意义。 1 材料与方法 1.1 样品采集与保存 从 2010 年到 2011 年，应用一次性手套，采集北京与大丰麋鹿自然保护区自 然环境中新鲜的麋鹿粪便，编号，置于冰壶，并同时记录粪便的颜色与性状。其 中，北京采集样品 23 个，大丰 87 个。样品处理前，4低温保存。 1.2 试剂 改良抗酸染色液：甲液(石炭酸复红 4 g，95 %乙醇 20 ml，苯酚 8 g，双蒸水 100 ml)，乙液(纯硫酸 10 ml,蒸馏水 90 ml)，丙液(0.2 g孔雀绿，蒸馏水 100 ml)。 饱和盐水(1
4、000 ml水加热至沸腾加氯化钠至不溶为止)。 胎牛血清、甲醇、蒸馏水。 2 1.3 试验材料 载玻片、盖玻片、20 ml 试管数只、试管架、酒精灯、镊子、一次性手套、 口罩、锥形瓶、烧杯、EP 管(0.5 ml、0.2 ml、7 ml、10 ml )、移液器、枪头、记 号笔、过滤纱布、漏斗、玻璃棒、标签纸等。 1.4 试验仪器及设备 光学显微镜(OLYMPUS-XDS-1B)、数码相机(OLYMPUS)、通风橱(苏净集团 安泰公司制造)、可调万用电炉(龙口市电路制造厂)、电子天平(上海精天电子仪 器有限公司)、离心机(湖南星科科学仪器有限公司) 1.5 试验方法 通过饱和盐水漂浮法和改良抗酸染色法来对麋鹿隐孢子虫卵囊进行检查。 具 体操作步骤如下所述。 1.5.1 饱和盐水漂浮法 按编号取麋鹿粪样3 g于20 ml试管中，将试管依次编号，加入已经配制好的 饱和盐水，用玻璃棒充分搅拌，静置1530 min后，过滤至已编号的待用试管中。 将滤液5 ml一一对应倒入已编号的10 ml EP管中， 加水适量， 放入离心机， 3000 r/ min，离心10 mi
