1、 本科毕业设计本科毕业设计( (论文论文) )文献综述文献综述 题目题目： 婴幼儿配方奶粉中强化维生素B12的检测技术 研究 学生姓名学生姓名 学学 号号 指导教师指导教师 专业班级专业班级 应用化学专业应用化学专业 所在学院所在学院 化学工程学院化学工程学院 1 婴幼儿配方奶粉中强化维生素婴幼儿配方奶粉中强化维生素 B B1212的检测技术研究的检测技术研究 1 前言 根据国内外相关资料，目前现检测维生素B12主要有4种方法：高效液相色谱 串联质谱法、微生物法1-2、高效液相色谱法 3及荧光光度法。其中微生物法是 通用方法。微生物法的优点是灵敏度高，但因为该法操作的技术点多，孕育周期 长，
2、成本高等缺点而不能在实验室里普及， 只有少数质检机构选用。 由于奶粉(主 要针对允许强化维生素B12的婴幼儿配方奶粉与调制奶粉)中的维生素B12含量较 低、基质较复杂，采用原子吸收法、高效液相色谱法等方法的检出限很难满足定 量测定要求。所以对于含量低，低于仪器检出限，无法采用仪器方法时，仍然需 要采用微生物法进行测定。公职分析化学家协会(AOAC）和美国药典(USP)和 中国国家标准GB/T5413.14-2010将微生物法作为测定维生索B12的主要方法和仲 裁方法，而仪器方法作为辅助方法。目前已有研究将液相色谱质谱联用对 4 维生素B12的检测，但由于仪器昂贵、技术难度大及准确性差等缺点难以
3、在企业 中普及。近年来出现的试剂盒测定方法也因重现性差、回收率低、成本高等缺点 较难推广，采用固相萃取技术测定维生素B12时，由于有些样品净化不够理想、 有干扰，尤其是奶粉等基质干扰比较大的样品测定效果更不理想。国家标准中规 定的维生素B12含量在婴幼儿配方食品中最低为8.0 g/kg 5。 1.1 维生素 B12的特性及功能 维生素B12又称氰钴素和钴胺素， 是一种由含钴的卟啉类化合物组成的B族维 生素。维生素B12为浅红色的针状结晶，易溶于乙醇和水，在pH值4.5 - 5.0弱酸条 件下能够稳定存在，强酸（pH 2）或碱性溶液中容易分解，遇热会受到一定程 度的破坏，但在短时间内的高温消毒损
4、失不大，遇紫外线或强光容易被破坏。维 生素B12广泛存在于动物食物中，如牛奶、动物肝脏、蛋、牛肉、奶酪等。人体 对维生素B12的需求量是所有必需维生素中最少的，每天3g就能满足人体的需 求。维生素B12的重要的生理功能有两个：作为甲基转移酶的辅因子，参与蛋 2 氨酸和胸腺嘧啶等的合成，因此维生素B12可促进蛋白质的生物合成，缺乏时会 对婴幼儿的生长发育有影响。保护叶酸在细胞内的贮存和转移，维生素B12缺 乏时则会影响到叶酸的利用受，导致人体周围神经炎。儿童缺少维生素B12的初 期表现是表情呆板、情绪异常、反应迟钝，最终致使贫血。 2 2 国内外对维生素国内外对维生素B12的检测方法的检测方法
5、2.1 微生物法 微生物分析法测定维生素B12的研究工作在国际上已经有几十年的历史了, 是较为原始也是最早的方法, 在美国发展的尤其迅速,但是我国这方面的报导还 不是很多。到目前为止，美国药典（USP） 、公职分析化学家协会（AOAC）和 中国国家标准GB/T5413.14-2010都将微生物法作为作为检测维生索B12的仲裁和 主要方法。微生物法的高灵敏度和可靠性已得到国际权威机构的认同。 2.1.1 基本原理 微生物法是食品国家安全标准（GB/T5413.14-2010）对婴幼儿乳品和食品中 维生素B12的测定方法， 检测限为0.1 g/100 g， 适合维生素B12含量低样品的测定。 微生
6、物法的基本原理是利用莱士曼氏乳酸杆菌对维生素B12的灵敏性和特异性， 定量检测出样品中维生素B12的含量。在检测用的培养基中加入除维生素B12之外 的全部营养成分， 这样微生物生长所产生的透光率就会同标准工作液和未知待测 液中维生素B12含量相对应了。以不同浓度标准溶液的透光率相对各标准物质的 浓度绘制标准工作曲线，根据标准曲线便可测定试样中维生素B12的浓度，从而 计算出试样中维生素B12的含量。 2.1.2 分析方法 测试菌液的制备： 将活化好的莱士曼氏乳酸杆菌接种到乳酸杆菌琼脂培养基 上，在36 1温度下培养24 h。再转种23代来增强活力。置温度在2 - 5冰 箱保存备用。 每15 d需转种一次； 将活化好的菌株接种到乳酸杆菌肉汤培养基中， 在36 1温度下培养18 h - 24 h，以转速2000 r/min,离心2 min - 3min，除去上清 3 液，加入10 mL生理盐水（9 g/L），混匀，如上离心操作2次，然后除去上清液。
