1、 本科毕业设计（论文）开题报告本科毕业设计（论文）开题报告 题目题目： 婴幼儿配方奶粉中强化维生素 B12的检测技术 研究 学生姓名学生姓名 学学 号号 指导教师指导教师 专业班级专业班级 所在学院所在学院 化学工程学院化学工程学院 1 (一) 课题的背景与意义 维生素B12是人体必需的维生素之一，是作为维持人体正常代谢和机能必不 可少的一种微量维生素，具有促进核酸的生物合成和活化氨基酸的作用，可促进 蛋白质的合成，它对婴幼儿的生长发育有着重要作用，缺乏时会影响婴幼儿的成 长发育。但过量的维生素B12,会有副作用，维生素B12对人体健康的影响主要由 缺乏所致， 现已经成为继叶酸之后全球疾病预防
2、和微营养素领域中关注的又一个 新的热点。所以对婴幼儿奶粉中强化维生素B12检测技术的研究有着非常重要的 意义。目前根据国内外相关资料，现在测定维生素B12主要有4种方法：微生物法 1、高效液相色谱串联质谱法、高效液相色谱法及荧光光度法2。微生物法是通 用方法。微生物法灵敏度高，但由于该法操作的技术点多，成本高，生长周期长 等问题而不能普及，只有极少数质检机构采用。超高效液相色谱-质谱联用建立 的测定方法分析速度快， 定量准确， 灵敏度高， 但由于UPLC-MS/MS技术难度大、 仪器昂贵等缺点难以在企业中普及。高效液相色谱相对于微生物法具有快速、重 现性好、分离完全等特点。效液相法是研究者主流
3、的测定方法。荧光光度法拥有 高的灵敏度和选择性，但易受温度、内部所含重金属原子和溶剂极性的影响，从 而造成荧光淬灭等现象。荧光分光光度法相对复杂，不适合进行大规模的样品检 测。随着高分子科学的进步和精密仪器制造技术的发展，维生素B12的分析已经 开始从微生物方法逐渐向仪器分析方法转变了。 (二) 研究开发的基本内容、目标，拟解决的主要问题或技术关 键 1 研究开发的内容 本课题主要是以婴幼儿奶粉中强化维生素 B12为研究对象，采用超高效液相 色谱-串联质谱联用技术，建立一套高效的分析方法检测婴幼儿奶粉中的维生素 B12。主要的研究内容如下： （1）运用液相色谱-串联质谱3-4仪器色谱条件和质谱
4、条件，建立婴幼儿奶粉 2 中强化维生素 B12的仪器分析方法。 （2）对于样品的前处理方法，本实验采用免疫亲和法。免疫亲和法5利用抗 原抗体特异性结合特性的固相萃取技术，根据抗原抗体的高选择性，从复杂的待 测样品中提取目标化合物， 是一种新型分离富集以及净化待测维生素B12的方法。 （3）对上述建立的维生素 B12分析方法进行方法学验证，通过对线性范围， 精密度，回收率，检出限和定量限等指标的考察，对所建立方法的稳定性和准确 性做进一步验证。 2 预期的研究开发目标 运用液相色谱-串联质谱联用技术，初步建立了婴幼儿奶粉中维生素B12的分 析方法，要达到预期的研究开发目标有： （1）线性范围，系
5、列维生素B12在10 g/L-500 g/L范围内，线性相关系数要 求在0.99以上； （2）回收率实验，系列维生素B12分别在低、中和高不同添加水平下，要求 回收率在85%-95%范围内； （3）检出限实验，要求系列维生素B12检出限在0.5 ng/g。 3 需要解决的关键技术问题，可能遇到的困难 至今维生素B12的检测是国际上食品分析的难题之一。因为维生素B12是人体 内每天所需量最少的一种维生素，所以在食品中的含量很低，根据国标规定在婴 幼儿奶粉中强化维生素B12的含量指标为 0.8 g/100 g6。其次，维生素B12主要 以B12-内因子复合物的形式存在，充分分离和提取难度很大；另外
6、，样品中其他 水溶性维生素的色谱行为与维生素B12相近也会对它的分离检测造成很大的干 扰。所以样品的前处理是技术关键之一，检测结果的重复性和准确性就主要取决 于样品前处理。 （三） 研究开发的方法、技术路线和步骤 3 1 研究开发的方法 （1）样品前处理技术的开发 由于奶粉基质复杂，为了实现奶粉中维生素 B12的有效分离，本课题选择免 疫亲和柱的前处理技术。 （2）婴幼儿奶粉中维生素 B12的仪器分析 优化质谱条件和色谱条件，建立对维生素 B12测定速度快，灵敏度高，重 复性好的仪器分析方法。 2 技术路线和步骤 （1）仪器与试剂 AcquityTM超高液相色谱仪、XevoTMTQ-MS质谱仪配有电喷雾电离接口 （ESI）及Masslynx数据处理系统和固相萃取装置（Waters公司）, 高速离心机， Milli-Q超纯水器，氮吹仪，涡旋混合器,维生素B12标准品(纯度大于99%),甲醇、 乙腈（德国Merck公司），0.03 mol/L磷酸二氢钾
