1、PDF外文：http:/ 1 中文 2790 字 出处： ARYA S. P, MAHAJAN M, JAIN P. Photometric Methods for the Determination of Vitamin CJ. Analytical Sciences, 1998, 14(5):889-895. 分光光度法测定 维生素 C 的含量 摘要： 维生素 C 的 重要性 已得到世界人们的 广泛认 可 。这 种 维生素的不足会导致各种疾病。鉴于其重要性， 已有 包括分光 光度法 的多 种 方法 用于测定 药品，食品和生物样本 中的 维生素 C 含量 。 人们 普
2、遍 认为可用 分光 光度法 测定 抗坏血酸的含量 。 关键词： 维生素 C 含量 ； 分光 光度法 1 引言 对于 不同的自然物质，测定 其中 维生素 C 含量的 方法亦不同。 它 可作为 药品 的 一种重要辅料， 复合维生素 B 的稳定剂 并 可 作为一种抗氧化剂。鉴于其 能产生良好的作用 ， 所以 被广泛用于治疗某些疾病，如坏血病 、 普通感冒 、 贫血 、出血性疾病 、 伤口愈合甚至不孕， 这些功能 已有 案件 证明 。 人们 认为维生素 C对发育以及 肌肉，骨骼，牙齿和皮肤 的 再生是至关重要的。 因此， 越来越多 的人使用含有维生素 C 的 药品
3、和其他自然 物质 ，这意味着 实 用 化学家应制定 其含量的 分析 方法，使 操作简单 、 快速 ，结果 准确 ， 具有 灵敏性和选择性。 想 发 明一种理想 测定 方法的 这个 愿望，导致 产生了许多不同的方法， 它 们有 不同的适用 条件 。许多 以仪器 为基础的分析 方法 ，包括 高效液相色谱 5 - 10 ， 极谱法 11 - 13 和 酶 14 -15方法 ，已 有文献报道。但由于其固有的限制，这些技术不常用 于 常规分析。然而，分光 光度法特别有 前景 ，因为它们速度 快 和 灵敏度高 。因此， 制订了许多类似的方法 ， 用于 测定抗坏血酸（ AA） 的含量
4、。 虽然 已有 一些短期 的评论 报道， 但仍需 一个 严格的方法来检查这些方法的突出特点和适用条件。 这项审查是 试图专门评估现有的分光方法 的 简便 性 ，快速性，比尔定律范围，灵敏度，选择性与 适用性 。这主要是基于 从 1970 年到 1997 年期间的化学文摘 所搜集的 信息 来评估。 2 结果与讨论 一些染料，如 DCIP， DMDQ、 茚三酮，快速红色美联盐和 2， 7-二氯荧光素等已 被 用来 测 定维生素 C 的含量 ， 其中 DCIP 被研究得最多 。它 被 列入正式的 滴定方法 ， 不同 国家的 药典 19
5、 - 21 均有收载， 同时也 成为 了 各类 比色法 的基础 。蓝色染料 （ DCIP）在加入 抗坏血酸 后褪成无色，如 图 1 所示。但它 在酸性溶液中呈粉红色 。使用 该 染料， 可在人尿中和加工过的西红柿中检测出 抗坏血酸 。多余的染料可以 用 二甲苯或丁醇 24 提取 出来。 许多物质 由于 能 使食物在烹饪和加工 2 过程中的颜色减褪，因此这些物质有干扰作用 。加里等人提出流动透析和 循环 流动 系统已 被 用于监测 DCIP 吸光度 下降的这种现象 。这种自动化系统显示 上述方法适用大量样本的 常规分析 ，否则只对单个样本进行分析是非常耗时的。 Dimethoxydi
6、quinone26 与抗坏血酸在磷酸缓冲 溶液 （ pH=6.6）中生成 紫颜色的 物质 。 靛蓝色染料褪色是因为形成了 醌氢醌 从而生 成紫颜色的 物质。如 图 2所示 。用 二氧六环稀释后， 该有色溶液在黑暗条件下只能稳定存在 24 小 时，并在 510 nm 波长 处测定 溶液的吸光度 。 加热可 减少颜色强度。比尔 定律的使用上限是 80 g/ml， 检出限为 10 g/ml 。核黄素和铜 产生 干涉。 由 硫酸 亚铁生成的沉淀物可通过离心除去。 虽然方法是不够 灵 敏（ = 1.62 103） ，它仍然 可用于氯仿萃取 柑橘 中的有色物质的分析 （
7、 max = 530 nm）。林等人报 道了一种方法 ， 该方法是以 抗坏血酸 与 快速红美联盐（ 1）（ 重氮化 1 - 氨基蒽醌 得 氯化锌盐）和 四氯苯醌 （ 2） 的反应为基础。 反应（ 1） 是 在酸性介质中 进行 的，但 只有 加碱 后才显 蓝色， 并显示出 500-630 纳米之间 有三个 吸收带 。 如果 使 用后 一个试剂（ 2）， 则 在 336 纳米 波长处测定 抗坏血酸（ = 535 平方厘米 /摩尔） 的含量，因为 在 7 10-4 M 四氯苯醌 的 80 丙酮水（ V / V）的 介质中，其 吸光度下降 。抗坏血酸与硫醇 的 混合物 ，如 邻
8、巯基苯甲酸， 巯基 琥珀 酸， 3-巯基丙酸不能 用这些方法测定 。 亚甲 蓝 30（ 3）和 茚三酮 31， 32 （ 4）应用 于 测定食品 中 抗坏血酸 的含量 。无色染料（ 3） 经 抗坏血酸 稀释后可用 氯仿 翠 取 ； 亚甲蓝二 氧化 氢衍生物已用于测定抗坏血酸（ max = 653 nm）。报告 指出 该方法 具有 高度 灵 敏 性 。抗坏血酸 与茚三酮 在 对沸水浴 下反应，介质为含 0.01 M NH4OH 的 80水溶液 ，此反应可用于 测定 药品 中的 抗坏血酸 含量 （ max = 415 nm ），但没有 增加该方法 的
9、优点 。 在六十年代，许多 报道的分析 方法 是以 抗坏血酸与苯胺重氮盐的耦合 反应为基础 的。这些盐与 抗坏血酸在碱性介质中 生成了一种 紫色或蓝色的物 质。重氮化-4-甲氧基 -2 硝基苯 与 抗坏血酸 在含有 乙醇或异丙醇 的 草酸介质 中 ， 碱性条件下呈 紫色 。 虽然 二价 铁 离子、二价 锡 离子与 DHAA 不 发生 干扰， 还原酮 和 还原 酸的形成 需要甲醛 做缩合剂 。 在 黄酮和果胶 物质 中， 低含量的维生素 C 也可被 检测。抗坏血酸 与 4- 硝基苯重氮 氯硼酸盐 在乙酸 介质 中的反应， 曾被 用于在 max 415 nm 波长 左右 测定其含量 。
10、但是 该 混合物，必须在黑暗中保 存 25 分钟， 然后加入 氢氧化钠 。这些被 稳定 的 重氮盐 ，可对它们的敏感性 进行了评 估 ； 发现 重氮化 硝基苯胺 -2 ， 5-二甲氧基苯胺 的 显色反应最激烈。 酶 33 - 35 比色法测定 市场上的 维生素 C 片 剂、 水果和蔬菜 中 抗坏血酸的 含量，在 358 nm 或 320 nm 处 测量吸光度 。 结果得到的产 物是 氧化邻苯二胺 /1,4 二胺 ， 3 该物质是被 抗坏血酸氧化酶或过氧化物酶 氧化 得到的，在 过氧化氢 溶液中， pH值为 5.3 。抗坏血酸 被 氯化汞氧化 并用 DHAA 4,5 取代 苯二胺 3
11、6 缩合 ， 从而生成 喹喔啉衍生物 ， 用于吸光度 的 测量。该 中 涉及 4 - 硝基 - 1 ,2 -苯二胺 37 （ max = 375 nm ）的方法非常复杂 ，工作量太大。 因为它涉及许多 耗 时的步骤，包括用 阴离子层析柱纯化样品。 不久以前 ， 对 药 品、 食品和生物 样本中 已 被 氧化和 稀释的 维生素 C 含量的测定已引起人们的重视。因为 AA 和 DHAA 氧化还原 物是 许多生物系统 的 一个重要组成部分 。 各 类研究员 38 - 45 在不同的实验室 完成了 用高效液 相色谱法同时测定两个 AA 和 DHAA。 Rose 和 Nahrwo
12、ld38 确定 在 254 nm 和 210 nm 紫外吸收波长 处测定 AA 和 DHAA，可 用于分析食品 、 生物 样品 和医药制剂。 Graham 和Donald39，使用 62.5 毫米 缩聚原磷 酸离子交换柱（ Aminex - HPX 87H ）在波长254 nm 处对 食物样本 进行 分析。这两种 方法 也被 用于测定 蔬菜 样品 40 中的含量，即 使用紫外检测器（ 254 nm）。 Tessier 等 人已报道一种对微量测定进行 验证 的方法 ， 微量测定就是用 高效液相色谱荧光法 测定 血浆中 被氧化和被稀释的 维生 素C 的含量，这种微量分析用
13、高效液相色谱荧光法 仅需已步就可完成，而且可避免衍生物的干扰。 抗坏血酸 与 取代苯 可生成有色物质，如 m-二硝基苯在 甲醛酒石酸和 三硝基苯 在酒石酸缓冲 溶液中，此时测两者中 抗坏血酸 ，其 浓度范围分别 为 2-50 g/ml和 0-125 g/ml。间苯二酚 48 甲醇溶液在盐酸酸性介质中 ， 与抗坏血酸 反应呈 淡黄色颜色（ max=425 nm）， 在 80-400 g/ml 范围内 服从比尔定律。 4 -氯 - 7-硝基苯并呋喃 49 与 抗坏血酸在氢氧化钠 溶液中生成 蓝绿色物 质 。 用 50（ V/V）的水丙酮溶液稀释 反应物 后 在 582 nm 处 测量吸
14、光度。 在 5-20 g/ml 浓度范围 服从比尔定律 ， 只有当远离阳光 和日光灯 直接照射 ，该有色物质才能 稳定 存在 30 分钟 。据 报 道： 该方法 能避免 所有其他维生素和存在于多种维生素制剂 中的矿物质的 干扰 ，并 可用于药物，新鲜果汁和蔬菜 的 分析。 哈什米等 人 50 提出了一种 以 2， 3， 5-三苯基氯化 物与 抗坏血酸在碱性介质中 的 反应 为基础的方法 。 这个 粉红色 溶液可允许 在黑暗中 ，温度为 25C 的 条件下存在 30 分钟 ；它的浓度在 5 25 g/ml 范围内 服从比尔定律。糖（ >15 g/ml）可形成与上述试剂 相同 的颜色 ，从而可排除 蔗糖 的 干扰 。 核黄素，维生素 B12和叶酸干由于自 身 具有 颜色 而产生干扰 。
