1、中文：http:/ 5945 字 出处： Bassam B J, Gresshoff P M. Silver staining DNA in polyacrylamide gelsJ. Nature protocols, 2007, 2(11): 2649-2654. 译文： 聚丙烯酰胺凝胶上 DNA 银染法 Silver staining DNA in polyacrylamide gels Brant J Bassam1 & Peter M Gresshoff2 本文描述了一种简单但更优越的银染法，应用于 聚丙烯酰胺凝胶 电泳 （ PAGE）之后
2、的 DNA 片段以及其他有机分子显像。其灵敏度与同位素放射方法相当，能准确检测 pg 单位量范围内的 DNA。该方法具有快速的优点（ 1h），而且运用时主要是使用容易获得的化学物质和材料。为了达到预期的灵敏度和清晰度，高质量的试剂和洁净的操作显得尤为重要。虽然本文所描述的最新方法是基于 Bassam et a 方法的广泛使用，但是可提供更高对比度的图像，且可降低人为污染染色的风险。 介绍 用 聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (PAGE)分离的复杂 DNA 样品和其他生物分子具有较高的分辨率，且该方法已被运用的非常广泛。然而， 为了实现 PAGE 的潜在优点，我们还需要有一种能够提
3、供更高清晰度和灵敏度的染色方法。基于这一点，本文描述的银染法符合这个要求。 作为一种染色方法，最初发展银染法的目的是为了检测 PAGE 分离后的蛋白质。之后，该方法被进一步优化，并应用于其他生物分子的检测，如核酸，脂多糖类，糖蛋白类和多糖类。但是这些早期方法的操作相对繁琐，且灵敏度有限。 Caetano-Anolles et al 对于 DNA 指纹谱图放大技术（ DAF）的发展要求一种更好的方法来充分地辨析和显像复杂的 DNA 图谱。这些要求直接导致聚酯 聚丙烯酰胺凝胶 与 DNA 银染法相结合和发展。 Bassam et al.单独地描述了为 DAF而发展的银染法，
4、该方法已经被广泛地接受，包括在商业领域（如 GenePrint STR系统，美国的 Promega 公司的银后续产品）。 DNA（其他生物样品）银染法有如下优点： 第一， 在正常环境光度下可进行图像的形成和显像。因此，该过程可以在实验室的工作台上进行操作，不用暗室或紫外照明设备。 第二， 由凝胶板上银离子和生物分子直接结合所致的高灵敏度和高清晰度可使图像进行更容易的辨析。因此图形的显像主要是从该基色原而来，不会褪色和移位，这就能 够用其他方法对凝胶进行二次处理，如荧光染色， 放射自显影 ，激光，做成胶片或进行数码图像处理。 第三， 银染法的灵敏
5、度与 放射自显影法 相当，但可以避免辐射操作，减少图像成形时间和实验步骤。 第四， 作为一种更好的选择，凝胶可放在半硬塑料薄膜衬垫上进行干燥，如GelBond PAG 薄膜，这样可对最初的材料进行永久的记录（ ref.10 是一种修改后的方法）。空气干燥的凝胶具有弹性，能保存高染色度和高对比度的图像。这样的凝胶可长期保存不变形，进行图像处理和打印时无需添加额外费用。此外，保存的凝胶就如“分子档案”，因为染色的 DNA 条带是可以被提取出来，放大，克隆以及能进行后续操作的真正的 DNA。 虽然本文所描述的方法是关于 PAGE 的 DNA 显像， 但是该方法也
6、可以不做修改地用于其它生物分子的显像，如 RNA，多糖类， 脂多糖类 ，蛋白质和多肽类。就其所试用的范围来说该方法具有范围广的优点，因此该方法在应用时须给予足够的重视。凝胶板上杂散的污染指纹就如其它生物杂质掺合进入凝胶板一样。因此，使用高质量高纯度的试剂显得尤为重要，包括纯净的水。 1. 材料 1.1 试剂 冰醋酸， AR (ACS).关键： 要获得高质量的结果，须用高纯度的试剂 。 硝酸银晶体， AR（ ACS） .关键：要获得高质量的结果，须用高纯度的试剂。 甲醛溶液 ， AR（ ACS） .关键：要获得高质量的结果
7、，须用高纯度的试剂。 硫代硫酸钠 .关键：要获得高质量的结果，须用高纯度的试剂。 碳酸钠粉末， 99.5%， ACS 试剂 .关键：要获得高质量的结果，须用高纯度的试剂。 乙醇 聚丙烯酰胺凝胶 定影液 显影液 显影终止剂 1.2 设备 带龙头的塑料盛酸容器（普通实验室供给） 普通实验室手套，关键：无粉手套 摇床或轨迹震荡仪（普通实验室供给） 盛放银溶液容器（向沉淀的银中加入 NaCl）（普 通实验室供给） 垃圾清理工具，普通
8、实验室供给 可选：为了把最初的凝胶完好地保存，我们用聚酯 聚丙烯酰胺凝胶 进行， Bassam and Bentley 描述的一种最新的方法。 循环水泵 第二代微型蛋白初产物仪 索尼 DSC R1 数码相机 1.3 试剂的制备 1.3.1 定影液 ： 用去离子水将冰醋酸稀释至 7.5%，室温保存 (18 25 1C)。一个容积适合的带龙头塑料容器。定影液较稳定，可大量配制。注意：溶液有轻微的腐蚀性（家用食醋的浓度为 5%），禁止吸入其蒸气。 1.3.2 甲醛溶液 :向 85ml 的去离子水中加入
9、15ml 的甲醛。注意 :该溶液的组成成分有毒性，应小心操作。参考当地职业健康与安全法规。关键：该溶液必须现配，确保甲醛在室温下保存，因为冷藏（如 4）会失活。关键：在准备之前，须估量容器是否足够盛放要染色的凝胶的数量和大小。 1.3.3 银溶液：将 0.1g 的硝酸银溶入 100ml 的去离子水中。注意 :该溶液的组成成分有毒性，应小心操作。参考当地职业健康与安全法规。关键：该溶液必须现配。关键：在准备之前，估计盛放准备染色的凝胶的容器的容积大小是否合适。 1.3.4 硫代硫酸钠存贮溶液：将 0.2g 的硫代硫酸钠溶入 50ml 的水中配制而成。关键：该溶液必须每周重配，所以每次尽量少量配制以免浪费。关键：在准备之前，须估量容器是否足够盛放要染色的凝胶的数量和大小。 1.3.5 显影液：将 3g Na2CO3 溶入 100ml 的去离子水中配制而成。为了加快溶解速度，避免凝集沉积，配置时缓缓加入 Na2CO3 并快速搅拌。关键：该溶液
