1、PDF外文：http:/ 5780 字 出处： Chemico-biological interactions, 2008, 171(1): 15-25 外文资料译文 口服二苯 基二 硒对镉致大鼠肝损伤 的保护作用 Borges L P, Brando R, Godoi B 摘 要 镉是 环境中 一种与人类疾病有关的 有毒金属。 本实验 旨在探讨 二苯基二硒，(PhSe)2， 对 长期暴露于氯化镉（ CdCl2）中 的大鼠的影响。 用 CdCl2（ 10mol/kg，口服 ） 和 (PhSe)2（ 5mol/kg，口服）对成年雄性 S
2、wiss 大白鼠进行 30 天的处理。许 多参数被作为毒性指标进行检测，包括肝肾损伤 、血糖和糖原浓度以及氧化应激标志物。镉含量、肝脏结构、 -氨基乙酰丙酸脱水酶（ -丙氨酸 -D） 活性以及金属硫蛋白（ MT） 也要 进行评价。染镉大鼠组织中的镉水平表明肝脏是镉的主要靶器官， (PhSe)2 也在其中发挥作用。肝脏中镉浓度大概为肾脏的 3 倍， (PhSe)2 使 镉暴露大鼠肝脏中这种金属的含量降低了 约 60%。 (PhSe)2 能减轻镉致大鼠发生的组织学损伤。镉暴露使血液中丙二醛 （ MDA）含量以及谷草转氨酶（ AST）、谷丙转氨酶（ ALT）、碱性磷酸酶（ ALP）、乳酸脱氢酶（ L
3、DH）和 -谷氨酰转移酶（ GGT）活性升高， 而 (PhSe)2 可使这种升高降低 。 (PhSe)2 也可以降低镉暴露增加的尿素和胆红素水平。总之，本研究表明， (PhSe)2 能减轻长期镉暴露所致的肝毒性和细胞损伤。本实验中 (PhSe)2 的作用机制是它的抗氧化性质以及与镉形成复合物的特性。 关键词： 镉，硒，二苯基二硒，肝损伤，氧化应激 1 前言 由于烟草、工业和农业生产，环境中镉 的 含量不断增加，已成为主要的毒性化学物之一。它在人体内的生物半衰期很长（ 10 30 年），其毒性取决于接触途径 、剂量及时间长短。急性镉中毒主要 引起肝脏和睾丸损
4、害，而慢性镉中毒引起肾损伤。大鼠镉中毒造成严重的肝损伤，主要表现为肝细胞坏死。 镉毒性作用的分子机制可能是机体抗氧化防御系统的紊乱和活性氧的产生。实际上， 镉是一种非氧化还原金属，它总是采用一个单一的氧化状态，而不是活性氧的诱导剂。镉毒性作用主要因为电子传递链的破坏以及线粒体中活性氧物质的蓄积。因此，有研究者认为， 抗氧化剂对有效治疗镉中毒有重要意义。 有机硒化合物特别是二苯基二硒 (PhSe)2 的药理研究发现，它的抗氧化性质及金属复合物的形成激发了它的作用机制， 这也是 本实验 讨论的主要内容。 (PhSe)2的抗氧化性质使其对不同组织的氧化损伤具有保护作用。镉与
5、(PhSe)2 形成复合物的研究已经见到报道，本实验主要探讨 (PhSe)2 对长期镉暴露下的大鼠的影响。 2 材料与方法 2.1 化学试剂 氯化镉（ CdCl2）购自默克公司（ Darmstadt，德国）； -氨基乙酰丙酸（ -丙氨酸）和 P-二甲基氨基苯甲醛购自 Sigma（ St.Louis， MO，美国）； 二苯基二硒， (PhSe)2，根据 Paulmier 合成， HNMR 和 CNMR 分析及光谱数据显示其结构正确 。对 (PhSe)2（ 99.9%）是由气相色谱 /高效液 相色谱法测定其化学纯度。 所有其他试剂均为分析纯，从标准的商业供应商获
6、得。 2.2 动物 使用我们自己繁殖的成年雄性 Wistar 大鼠（ 200-250g）。 在一个单独的动物房饲养 这些动物， 12h 光 /暗周期， 222 室温，自由采食和饮水。 这些动物的使用是根据巴西圣玛丽亚联邦大学实验动物资源的护理和使用委员会所制定的准则。 2.3 实验方法 大鼠每两日口服给药 CdCl2 和 (PhSe)2，使用强饲法，为期 30 天。每一实验组的 6 只大鼠要经常测试。 CdCl2（ 10mol/kg，溶解于生理盐水， 1mL/Kg）进行处理， 30min 后，用 (PhSe)2（ 5mol/kg，溶解于菜籽油，
7、1mL/Kg）处理。 (PhSe)2 的剂量是根据我们实验小组之前的研究。 大鼠处理如下： 第 1 组：生理盐水 +菜籽油； 第 2 组： CdCl2 10mol/kg+菜籽油； 第 3 组：生理盐水 +(PhSe)2 5mol/kg； 第 4 组： CdCl2 10mol/kg+(PhSe)2 5mol/kg。 最后 一次 CdCl2 注射 24h 后，直接从麻醉动物的心室采集血液样本 。随后， 断头处死老鼠，摘除肝脏，迅速在 pH 值为 7.5 的 50mM Tris-HCl（ 1/10， w/v） 中 进行 组织匀浆
8、， 2400g 离心 15min。 2.4 肝细胞损伤指标 用试剂盒 测定 血浆酶谷草转氨酶（ AST），谷丙转氨酶（ ALT），碱性磷酸酶（ ALP）， -谷氨酰转移酶（ GGT），乳酸脱氢酶（ LDH）水平 。根据 Reitman 和Frankel 使用的试剂盒（实验室检验， Diagnostica S.A.， Minas Gerais， 巴西 ）， IFCC（国际临床化学家联合会）。 2.4.1 胆红素含量 血浆总估计，根据 Malloy and Evelyn 对直接和间接胆红素含量 测定所 用 的 试剂盒 （实验室 检验， Diagnos
9、tica S.A.， Minas Gerais，巴西） ，通过分光光度计测定。 2.5 肾损害的指标 使用试剂盒（实验室检验， Diagnostica S.A.， Minas Gerais，巴西），通过测定血液中尿素和肌酐水平分析肾功能。 2.6 血糖水平 根据 Malloy and Evelyn，对血糖含量用试剂盒（实验室检验， Diagnostica S.A.，Minas Gerais，巴西），通过分光光度计测定。 2.7 糖原 测定 肝糖原的含量测定使用 Krisman 的方法。简单地说，一个已知量 的肝脏在 2mL
10、 30%的 KOH 溶液 中溶解 。 再在试管中加 2mL 乙醇， 沸水 水 浴 10min。经过沉淀，糖原 悬浮于 0.2ml 5N HCl 和 0.8mL 蒸馏水 中 。 用碘试剂 460nm 处测定 肝糖原的含量 ，用克糖原 /100 克 肝 表示。 2.8 丙二醛（ MDA） 分别量取各组血液样本 200L 用于 MDA 测定。用于分析的方法是自动酶联免疫吸附试验 -免疫检测。 2.9 -氨基乙酰丙酸脱水酶（ -丙氨酸 -D）活性 通过 Sassa 的方法，用 1M 钾磷酸盐缓冲液和 pH 值 6.8 的 12mM 的氨基 乙酰丙酸 （ ALA） 测定产物生成量 ， 分析肝脏 -丙氨酸 -D 活性。 39 下反应 30min，555nm 条件下测定反应产物。 2.10 过氧化氢酶的活性 根据 Aebi 法， 测定过氧化氢分解来分析肝过氧化氢酶的活性 2.11 超氧化物歧化酶活性 根据 Misra 和 Fridovich 的方法，用分光光度计测定超氧化物歧化酶（ SOD）的活性。这种方法是基于 SOD 能够 抑制肾上腺素自氧化的能力。显色反应在 480nm处测定。一个酶单位定义为 在 26 抑制 50%肾上腺素自氧化率 所需的酶 量 。
