1、 PDF外文： http:/ 中文 4880 字 外文翻译 拥有再生能力和交配型稳定性的香 菇原生质体的高收益制备 High Yield Preparation of Lentinus edodes ("Shiitake")Protoplasts with Regeneration Capacityand Mating Type Stability 1 拥有再生能力和交配型稳定性的香 菇原生质体的高收益制备 原文来源
2、： Kawasumi T, Kiuchi N, Futatsugi Y, et al. High yield preparation of Lentinus edodes (" Shiitake") protoplasts with regeneration capacity and mating type stabilityJ. Agricultural and biological chemistry, 1987, 51(6): 1649-1656. 摘要 ： 香菇原生质体的释放和再生的一种有效的方法被开发，利用纤维素酶和几丁质酶的酶混合物， pH 值 4.
3、6。小的均匀菌丝体原生质体材料被迅速培养在用菌丝片段 接种后的木质部的液体培养基中。他超过 6107 原生质体 /ml/4hr 的制备和超过 15%的再生被实现。通过原生质体来源的单核菌株的交配形成了双核体可能发展成为完整的子实体在小规模木屑栽培（ 30 克介质）中 50 60 天。原生质体或聚乙二醇融合处理后，交配型得到了充分完好的保存。 在包括原生厦体融台和核酸注入的诸多基础科学和应用科学研究中，原生质体应用龅潜力正在不断得到发掘，在包括多种食用菌的担子萤研究领域也有这样的势头。 香菇是日本最重要的食用菌，占商品食用菌的 60%以上，寻找一种制备供育种
4、用的香菇原生质体 的好方法是人们强烈的愿望。然而目前只有很少几篇涉及香菇原生质体的文章发表，并且在这几篇文章中，香菇原生质体的产量和再生率与裂褶菌、鬼伞、平菇相比非常低 。 因此 ， 与其它菌尧衽比，例如荻益鬼伞的不能自然结台的种内子实体形成和在遗传上不亲合的菌落的形成，平菇种内子实休和种间菌落的形成，以及在裂褶苗原生质体中整个注几脱氧核糖核酸 (DNA)的成功等，原生质体融合技术在香菇这种重要食用菌育种上的应用就相对进展缓慢。 本文叙述了一种有效的原生质体形成和再生方法，这种方法制备的原生质体足够用于原生质体融合实验 ， 并对经过原生质 体化或聚乙二醇 (PEG)处理的原生质体再
5、生菌落的交配型稳定性进行了精确捻查，面且进行了短期内的快速出菇试验。 材料和方法 菌株 ：单核菌株是单孢分离的 Mofi讼司的 Co.440和 252号菌株双核菌株由 Meljlserka公司赠送 ， 菌株在 1.5%琼脂的斜面上保存，斜面培养基在每公斤中含麦芽汁 10克，酵母汁 4克，葡萄糖 4克（ MYG培养基）。 华中农业大学本科毕业论文外文翻译 2 试剂： Sanpearl CP， BSD、 LS和本质素： 为 Sara- okokusaku果酱公司和 Tokyo kase公司生产，纤维索酶 yc：东京 Sel
6、hn制药公司生产 jN一乙酰胞壁酶 SG，东京Seikagaku kogyo公司生产，麦芽汁、酵母汁：美国 Difco公司生产琼脂：日本东京 kyokuto公司生产。 原生质体的制备：收集液体培养的菌丝于培养皿内，使用剃刀 （ atherAnzenkamisorl公司生产 ） 蒋其轻轻挤切成微小菌丝片段，然后用孔径为 129微米的尼龙网过滤，将微小菌丝片段收集，接种到 l0ml含有 0.4%Sanpeatl Cp和 0.005木质紊的 MYG培养液中 （ 100ml三角瓶容器内 ） 。在 25 、相对湿度 70%、 l2小时昼夜变化节律条件下，静止培养 4天 ，幼龄菌丝
7、用含 0.6M甘露醇的 0.05M丁二酸缓冲液洗涤，轻轻挤出水分， 以每毫升混合酶液含 1 00-120毫克菌丝的比倒与 2一 3%纤维素酶 Onozaka RS和 0.1%(4 0Um!、 Sigma)几丁质酶组成的混合酶液混台， 30 下在 20mI带塞小瓶中进行酶解反应。混合酶液在含 0.6M 甘露醇的 0.05M丁二酸缓冲液中配制， PH4.6。 原生质体的再生菌落的形成： 运用上述方法制各的原生质体用孔径为 60微米的尼龙网过滤，血球计数板计数， 用再生培养液梯度稀释到 l0 -4。再生培养液为 MYG 中加入0.4%Sanpearl
8、cP和 0.6M蔗糖， 即 MYGCPs培养基。取 200微升梯度稀释的原生质体悬液涂到 1.2%琼脂的 MYGcPs再生培养皿上 （ 直径 6.0厘米 ） 。在 25 、相对湿度70% 、 12小时昼夜节律条件下培养。 14天以后以培养皿中菌落的数量来计算再生率， 出现在不含渗透压稳定剂的培养皿上的，不是从原生质体再生出来的菌落数量作为对照从中扣除。 交配型的检验：每一个单核菌丝的交配型通过在琼脂培养基平板上双配对培养(Confronfing Culture)确定， 由 A B亲合配对形成的双核菌丝的 锁状联合和由 AB=配对形成的假锁状联合通
9、过显微镜检查确定，由 AB=配对， 将两个单核菌丝的微量尖端菌丝混合接种到液体培养基内培养以进一步确证其假锁状联合是否存在。 融合处理： 聚乙二醇 (PEG)诱导原生质体融合的方法同前所述， 30%PEG4000溶于0.01M氯亿钙的 0.05M马来酸钠缓冲液中， PH5.5。 子实体的形成：小规模术屑栽培方法基本上同前所述。 Saapearl cp以 0.4%的量添加到培养料内，经过 30-40培养，用 80毫升无菌水倾注到烧杯中，保持 16.5 过夜， 然后将水倾析出来， 然后培 养仍保持在 16.5 条件下。
