1、 外文翻译：http:/ 中文 2700 字 出处： Biologia plantarum, 2004, 48(1): 129-132 八种野生郁金物种的体外植株再生和遗传保护 In vitro plant regeneration and genotype conservation of eight wild species of Curcuma 组织培养和冻存组，国家局植物遗传资源 ，新德里 - 110012，印度 Albert Katz Center for Desert Agrobiology, Ben-Gurion Uni
2、versity of the Negev, Sede Boquer Campus, Israel* 摘要 ： 对八种郁金野生物种的体外植株再生和中期基因保存方法进行了优化。这两种现象都存在基因型依赖性，所使用细胞分裂素的种类和浓度对其有着显著的影响。 在一般情况下，发现苄基腺嘌呤（ BA）比测试的其他细胞分裂素有利于植株再生和异戊烯基腺嘌呤（ 2iP）则有利于 基因型 保护。 每个发芽数介于 1.3 至 7.2 和贮存期由 264 至 379 天。 在 30 天的 培养后， C malabarica 在 MS +11.4 M zeatin（ 7.2 个 芽）中芽的再生频率最高。郁金
3、（未知的野生种）在MS +24.6M 的 2iP 中可能存储期最长，最长期限（ 379 天）。其次是 C. aromatica 在 MS+22.8M zeatin 中（ 363 天）。 组织培养的植株同他们的母本形态相似。在体外培养保存的植物的组织可以快速繁殖及转移到温室土壤中产生正常的根茎。 关键词 ： 种质资源，遗传资源，微体繁殖，组织培养 姜黄属植物（姜科）由 80 余种根茎型多年生草本植物组成，广泛分布于亚洲热带地区，亦分布于非洲和澳洲。 体外技术可用于郁金种质资源保护，马铃薯，木薯和山药种质资源 的情况可以证明。在我们的实验室组织培养已成为无性繁
4、殖和各种作物品种保护的有效方法。直接组织培养再生植株（不通过愈伤组织）是体外保存计划成功的先决条件因为 通过愈伤组织诱导再生植株可能导致体细胞无性系变异。Nadgauda 等（ 1978）和 Balachandran 等（ 1990 年）报道了以 C.longa 根茎上的芽作为外植体进行体外增殖和通过叶片诱导的愈伤组织进行增殖。然而，除了 C. aeruginosa， C.caesia（ Balachandran1990 年）和 C.aromatica (Nayak 2000)，这些 关于野生物种的快繁报告是无法现成利用的。 .迄今用于野生郁金物种的保护的体外技术还没有系统工作的报
5、告。目前的研究对野生郁金的直接植株再生和有效保护的体外方法进行了优化。 根茎的芽采自八种野生郁金物种的根状茎的新芽，分别为 C. aeruginosa Roxb （ TCR2237）， C. aromatica Salisb（ IC88850）， C. brog Val（ IC29881）， C. caesia Roxb（ IC311735）， C. malabarica Velayudhan 等（ IC88846）， C.raktakanta Mangaly andSabu（ IC88862）， C. soloensis Vel（ IC136971）和 C.sp. （ TCR22
6、0， 未确认的的野生种），这些植物种植于印度新德里的国家植物遗传资源局（ NBPGR）。将 芽（ 2 -3 厘米）切下来，用流动的自来水彻底冲洗去除土壤颗粒。剥除鳞芽外层，在含有 2 到 3 滴吐温 20 的水中浸 20 分钟，用蒸馏水洗 7 或 8 次作为外植体。 用含 2 或 3 滴吐温 20的 1g/L 氯化汞对芽表面消毒 10- 15 分钟，随后用灭菌水彻底清洗 7 到 8 次。灭菌后的芽移到含（ 11.1M 的 N6 benzyladenine（ BA）的 MS 培养基中，体外培养用于研究再生和保护的再生芽， 切取繁殖两周后的芽移到含 11.1M BA 的 MS 培养基，并除去叶片。
7、芽的基部部分包含由叶环绕的茎尖 ， 从基部切 1 到 2cm 在含有各种细胞分裂数的 MS 中培养。 四种细胞分裂素分别设两个浓度（ 2.5mg/L- 5mg/L）即11.1M和 22.2 MBA， 11.6M和 23.2M kinetin， 11.4M和 22.8M zeatin 及 12.3M和 24.6M 的 ,-dimethylallylaminopurine（ 2iP） 。所 有培养基加入琼脂（ 7.5g/L）用0.1M 的 NaOH 调节 PH 至 5.8 然后倒入培养管中。每个培养管培养一个外植体。培养基在 121 ， 1.06kg/cm-2 的压力下灭菌 20 分钟。在 25
8、2 ， 40 mol m-2 s-1 的光照 16h 下培育 所有使用的化学品均为分析纯。 当一些再生芽叶片显示萎黄但含茎尖的芽基部绿色时进行继代培养。从培养开始至下一个继代培养被认为是一个特定的培养保护期。剩余的植株分别在硬塑料花盆（直径 15 厘米）培养 2 周，土壤包含珍珠岩：爱尔兰泥炭藓：蛭石（ 1:1:1）用MS 湿润溶解主要的盐。试管苗在 25 2 ，高湿度（ 75 -85）的条件下培养 1-2周。将 3 周大的强壮植株转移到花盆（直径 30 厘米）的土壤中，在培养室生长。 每次处理包括 18 个培养和重复 3 次。因此，每隔 30 天进行一次数据记录，记录
9、每个培养管的再生芽数和 54 个培养管的均值。 该实验的设计是完全随机的。数据经过方差分析和邓肯的多个范围测试 （ DMRT, Gomez and Gomez 1984），以测试不同的意义。 根茎上芽的萌发期在 6-8 天。在含 11.1M BA 的 MS 培养基中，两三个芽开始从一个单一的根茎芽 外植体生长出来。 最初，获得 40- 45的健康的植株；污染的植株再次消毒 2 次后用新的培养基进行再次培养获得 55%健康的植株。在 2 周后，在相同的培养基中获得 1 到 2cm 长的芽用于进一步的再生和保护的研究 表 1 郁金野生物种的再生芽 ；添加不同细
10、胞分裂素的 MS 培养基培养 30d 后的再生芽的记录数据在同一列不同字母表示 1水平的显著性差异。 F 值表示高度显著。 表 2 四种细胞分裂素（在两个浓度）对体外保存郁金野生物种（天数）的影响。 在所有的物种测试中所有细胞分裂素都使用两个浓度，外植体 100%来自 于 茎基部。然而，芽的形成量在各种不同的物种是不同的（表 1）。培养 3 周后，新芽形成小芽（ 1-2cm）。在 4- 5 个星期的培养中观察芽数，没有进一步增加。芽的再生遵照每个物种的独特模式。测试物种种类和细胞分裂素对芽的再生有着显
11、著的差异。所有的物种合计，每个培养管芽数平均为 1.3 至 7.2（见表 1）。 C. malabarica 在MS+11.4Mzeatin 中 产生最多数目的芽（每个 7.2 个芽）。 C. aromatica， C. brog，C.caesia， C.raktakanta 和 C.sp 在 MS + 11.1 M BA 中能产生较多芽。 BA 有利于C.longa 和 C. aromatica（ Nayak2000 年 ）快速繁殖已经有文献报导。 2iP 对 C. longa再生芽作用见于 Salvi 等的报道中， 但在我们的研究中没有发现野生物种芽数在 2iP培养基中高于其他细胞分裂素的
12、培养基。没有数据表明在有各种分裂素的培养基中培养物发现较长的芽。 然而， C.brog 在 MS +11.6Mkinetin 中有 最高长度的芽（ 5.6厘米） ，其次是 C. aromatica 在 MS + 11.1 M BA 中的芽 (4.8 cm)。 生根不影响芽发育成 植株。观察发现培养 4 周后在所有培养基上生根。不用尝试去收集每个芽的根的确切个数，根是否来源于单独的芽在培养中难以区别。然而，观察转移到土壤中的植物，每个芽有 2 -4 个主根。 每个物种移植到泥土中存活的强壮的植物高达 96- 100的存活率跟 Salvi 的等人的意见一致。组织培养的植株同母本的形态相似。 对再生植株的遗传稳定性进行了研究使用 8 种同工酶和 RAPD 分析，并没有发现体外保存植发生变异。基于遗传稳定性研究的详细结果将进行单独的报告。
