1、PDF外文：http:/ 2750 字 Journal of Ocean University Of China ISSN 1672-5182， 4 卷，第 3 期， 7.30， 2005，pp.248-251 高效液相色谱检测法对鲤鱼肌肉中甲基睾酮残留物的初步验证 摘要 ：在中国，将合成代谢类固醇甲基睾酮（ MT）为生长促进剂是被明文禁止的。食物中对甲基睾酮残留的分析结果表明残留物是不可缺少的。用高效液相色谱法（即三氯甲烷 - 甲醇与液 - 液萃取的方法）检测鲤鱼肌肉组织的初步验证结果参照以下参数：恢复性（准确度）在 1,5 和
2、10mg/kg 之 间，组间和组内检测 CV值（重复性，也被称为相对标准偏差（ RSD）以及检测限制之间。恢复性在 80以上，肌肉组织及组间和组内 CV 值低于 10，检测限值为 0.05mg/kg。 关键字： 甲基睾酮、液 -液萃取、高效液相色谱法、验证 1.前言 甲睾酮（ MT）是一种合成的促蛋白合成类固醇，且已作为一种促生剂广泛适用于畜牧业和水产养殖。然而，甲基睾酮引起的人类食品安全问题仍然是一个悬而未决的问题。人类长期接触甲睾酮对健康会带来不利的影响，如肝中毒（韦斯特比等人， 1977 年 ； 卢西， 1987 年 ； 哈特勒布， 1990 年）和
3、胎儿毒性（格伦巴赫， 1960 年 ； 沙尔丁， 1980 年）。因此，人类摄入有甲基睾酮残留物的鱼类时，会对自身健康带来很大的危害。 欧洲共同体的国家使用甲基睾酮（如甾体激素）以达到使牛育肥的目的，而这自 1988 年以来已被禁止。 1999 年，我国就已经禁止将甲基睾酮作为生长促进剂。然而，在水产品中并没有对甲基睾酮残留物的分析标准。因此，我们很有必要对这些已经禁令产品的使用做一次筛选分析和调查。 为了保证肉类产品的安全，人们已在广泛研究甲基睾酮残留物的检测方法。肉类等合成代谢类固醇的检测比其他常用基体（比如尿液和血浆） 更加复杂。ELISA（酶联免疫吸附试验）一般
4、是用作筛查尿液的一个更加快捷的方法（格塔尔， 2000）。 GC - MS（气相色谱质谱）是一种广泛应用于检测肉类中合成代谢类固醇的多残留的方法（哈特曼和斯坦哈特， 1997 年 ； Daeseleire 等， 1998；马尔尚等， 2000；施密特和斯坦哈特， 2002 年）。但是， GC - MS 检测方法需要准备的样品既复杂又耗时，一般只用于类固醇的衍生物。但是在中国，大多数实验室都难以接受该试验设备的高成本购置。 这项研究的目的是验证分析技术在实际应用中的鲤鱼肌肉甲基睾酮残渣的检 测。用一个简单的液 - 液萃取高效液相色谱法分析方法进行的验证。 2.
5、实验 2.1 抽样 来自青岛市场的鲤鱼肌肉样本被用来验证方法。他们储存在 20，并用家用搅拌机（飞利浦， HR2860， Horland）匀浆并马上分析。 2.2 化学品和试剂 分析纯试剂，包括三氯甲烷和氯化钠路堵化学试剂（中国上海），甲醇（ HPLC级） Kemiou 化学试剂（中国天津）。纯化水与 Milli - Q 系统（ Millipore 公司，贝德福德，马萨诸塞，美国）。 2.3 标准 （ 17 -甲基 - 4 -雄酮， 17 -醇 - 3 -）与 97以上的 纯度标准的类固醇甲基 WAKO（日本）
6、，该公司股价在 20 gmL- 1 在甲醇溶液，在准备和储存 -20 C 的工作方案 0.1 gML - 1， 0.5 gML - 1， 1 gML - 1， 3 gML - 1， 5 gml - 1 和 10 gML - 1，使用前准备，可以保持在 4 C 为一个月。 2.4 提取 在 10 克肌肉里加 3mL 饱和 NaCl 溶液和 9 mL 甲醇匀浆 2 分钟，后加入 10毫升三氯甲烷匀浆 2 分钟 . 混合搅拌 15 分钟，加 10 毫升三氯甲烷，持续搅拌15 分钟，离心 10 分钟， 5000 转，将上清液转移到一个分区漏斗 .残留物中
7、加 10mL饱和 NaCl 溶液和 10 mL 甲醇。重复提取。合并提取液漏斗（至少 8 小时）在夜间在同一个分区漏斗。在圆底烧瓶中收集下层溶液并在 50 C 真空蒸发器中蒸发至干。残留物溶解在 2毫升流动相和 20 L每个样品注入到高效液相色谱系统。 2.5 甲睾酮高效液相色谱检测方法 色谱系统包括所有从安捷伦以下组件（安捷伦， HP1100 型，美国）： C18 反相色谱柱 (4.6mm 250 mm,柱填料粒径 5 m），泵系列系统， G1314AVWD 探测器覆盖范围为 190 - 600 nm 的调整，以 254 nm 和 20 L 循
8、环喷油。柱温为 30 C.流动相为甲醇（ 70） /水（ 30）。流速为 0.8 mL min - 1 的。进样量为 20L。 2.6 验证 确定恢复参数的检测方法的准确性。用甲基睾酮标准溶液回收率实验确保在10.00g 鲤鱼肉里分别 1 mg kg-1,5 mg kg-1 和 10 mg kg-1。同时，制备空白样品。 之间的运行和内部运行 CV 值的重复性参数精密的检测方法是确定的。三种鱼肉样品进行分析时确保每个设防水平之间的运行 CV值在 1 mg kg-1, 5 mg kg-1 和 10 mg kg-1。三个平 行的肌肉样品都注射 5 mg kg-1 来确定运行的 CV 值。 设防水平与肌肉样本的检出限分别为 0.05 mg KG - 1。 3.结果与讨论 3.1 甲基睾酮标准线性 如图 1 所示，甲基睾酮的标准曲线的线性范围 0.1-10 g mL-1。在此范围的甲基睾酮标准浓度与锋面积有密切的线性相关。
